基因過表達(dá)
2022-08-14
根據(jù)基因整合位點(diǎn)的確定性，可分為：
定點(diǎn)條件性基因過表達(dá)
隨機(jī)整合轉(zhuǎn)基因
Rosa26位點(diǎn)是目前最為常用的定點(diǎn)整合位點(diǎn)之一。它位于小鼠6號(hào)染色體，是一個(gè)非編碼基因，已被證明在大部分組織和細(xì)胞中都有表達(dá)。表達(dá)比較活躍的基因區(qū)域因?yàn)樾枰D(zhuǎn)錄因子的進(jìn)入基因組結(jié)構(gòu)不會(huì)被異染色質(zhì)化，因此在這個(gè)區(qū)域定點(diǎn)插入外源DNA，在各組織中表達(dá)的可能性都非常高。所以，Rosa26被廣泛用來作為外源基因表達(dá)的安全位點(diǎn)。
利用Cre-LoxP系統(tǒng)對(duì)目的基因進(jìn)行可誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控。構(gòu)建Rosa26-(SA/pCAG)-loxp-Stop-loxp-cDNA-pA 重組載體，將條件性過表達(dá)結(jié)構(gòu)插入到Rosa26基因intron1中。該類型Knockin小鼠可與各類表達(dá)Cre重組酶的工具鼠雜交，獲得組織特異性表達(dá)外源基因的條件性過表達(dá)小鼠模型。
可避免隨機(jī)整合轉(zhuǎn)基因模型中多拷貝數(shù)、多位點(diǎn)插入、表達(dá)不穩(wěn)定、需要建系等煩惱
可實(shí)現(xiàn)外源基因穩(wěn)定的可調(diào)控表達(dá)，避免全身性基因過表達(dá)可能導(dǎo)致的不可預(yù)測(cè)的異常表型
可進(jìn)行超大片段（20-30kb）定點(diǎn)整合
除Rosa26位點(diǎn)以外，另有多個(gè)位點(diǎn)可供選用，滿足不同研究需求
可用于基因功能、蛋白功能的過表達(dá)研究
可用于KO表型的Rescue實(shí)驗(yàn)
可用于在沒有人同源基因的情況下的人源基因表達(dá)模型
可用于人類疾病基因突變
利用高效PB轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，更高效地獲得轉(zhuǎn)基因小鼠模型。將目的片段克隆至PiggyBAC轉(zhuǎn)座子質(zhì)粒中，與轉(zhuǎn)座酶一起注射到小鼠受精卵中；在轉(zhuǎn)座酶作用下，目的片段會(huì)被整合到基因組上的TTAA位點(diǎn)處，獲得轉(zhuǎn)基因小鼠。由于piggyBac轉(zhuǎn)座子在轉(zhuǎn)座酶的輔助下特異性識(shí)別基因組中5’-TTAA-3’位點(diǎn)，精確地剪切和插入不留下印跡，并且在隨機(jī)插入基因組的過程中，更傾向于插入有活躍轉(zhuǎn)錄的位置，故而能夠大幅提高轉(zhuǎn)基因小鼠外源基因的表達(dá)陽性率。
快速高效獲得轉(zhuǎn)基因首建鼠Founder
可利用熒光素酶報(bào)告基因，通過活體成像系統(tǒng)快速判斷Founder鼠目的基因表達(dá)
